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          正文
        胎牛血清細胞培養中如何防止黑點的生成?
        文章來源:上海滬峰化工有限公司   添加時間:2020/9/9 9:29:58 點擊率:745

        有客戶問胎牛血清細胞培養中如何防止黑點的生成?對此我們進行了多次試驗,得出以下結論,對此一定要做好以下幾點,方可使細胞培養順利。

        (1)盡可能地減少血清凍融次數。

        (2)培養基無需37℃水浴。

        (3)培養基保持PH值7.0- 7.2。

        (4)嚴格控制配制培養基的水質,容器定期刷洗。

        (5)掌握細胞傳代的時機,細胞切勿生長過老。 


        1、化凍

        將血清從-20度冰箱中取出,室溫(或浸于自來水中)化凍(約需要30分鐘至2小時,也可放于4度冰箱化凍過夜;化凍后若不馬上滅活,可以放入4度冰箱中暫時保存。 

        2、滅活

        (1)放入室溫的水浴鍋內開始加熱(同時放入一個空的血清瓶,內裝100ml自來水,插入一根溫度計,溫度監控以此為準)

        (2)當溫度計顯示56度時,停止加熱,改為間斷加熱,維持56度(±0.5度)30分鐘(±3分鐘;若不小心使溫度上升超過56度,則:若仍未超過60度,且時間很短,比如不超過5分鐘,則仍可使用;若超過60度,或者時間較長,則棄去不用,或者嘗試用于一些普通細胞的培養)

        (3)取出,自然冷卻至室溫(約需1-3小時),可分裝或-20度繼續凍存。

        3、分裝

        (1)轉入無菌間,在超凈臺內將血清分裝入10ml離心管中(注意預先要將血清輕輕搖動數周、混勻; 用吸液管或吹大管吹出血清時要注意:不要吹出氣泡(血清很粘稠,很容易產生氣泡;如果產生氣泡, 則在酒精燈火焰上過一下) )

        (2)放入-20度冰箱凍存

        (3)全部操作約需要4-6小時

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